バイオ基礎技術シリーズ (第3回)

(6) SDSポリアクリルアミドゲル電気泳動 (10:30～13:00)

　SDS-PAGEは誰にでもできる簡単な方法? でも、バンドが曲がったり、スマイリングなどの様々な変なバンドとなることがあります。これらの原因と解決策を、原因から解説します。

1. タンパク質の基礎知識の確認
   • 電気泳動を行う上で必要な知識を再確認します。
2. タンパク質の分析や精製・解析における電気泳動の位置づけ
   • 分析・精製・解析などの手法の中で、電気泳動が常に位置づけられています。
3. 電気泳動のクレームと異常バンド
   • メーカーでお客様より受けたクレームや、異常なバンド例をお見せします。
4. SDS-PAGEの原理
   • ポリアクリルアミドゲル電気泳動の条件により、分離性能は変わります。
     これを利用することで、より多くの目的と達成できます。
5. SDS-PAGEの各プロセスと留意点
   • ゲル作成から泳動条件までの留意点を解説します。
6. 異常バンドの解説
   • 異常バンドの原因を解説し、綺麗な泳動像を出す為のコツを解説します。
• 質疑応答

ウェスタンブロッティング (13:50～16:30)

　ウェスタンブロッティングでは、分子量により転写効率が異なることや一部分が全く転写されないなどのトラブルを見ることがあります。これらの原因と解決策を、原因から解説します。

1. ウェスタンブロッティングの原理と一般常識の勘違い
   • ゲル中のタンパク質を膜に転写するとは、どのように考えれべきか。
2. ウェスタンブロッティングの各プロセスの解説
   • 各プロセスの操作方法と、操作上の留意点を解説します。
3. ウェスタンブロッティングでのトラブルとその理由
   • 染色ムラや抜けなどのトラブルの解決方法。
4. 親水性タンパク質と疎水性タンパク質
   • 親水性の強いタンパク質と疎水性の強いタンパク質では結果に差が出ます。
     それは何故でしょう。解決策も含め説明します。
5. ブロッキング剤と各メーカーの機器
   • ブロッキングの目的とブロッキング剤の種類
   • 各主要メーカーの選択基準
• 質疑応答